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你会用裂解液吗?

2017-12-08 11:13:13  常州必达科生物科技有限公司  作者:SystemMaster  来源:流式中文网

对骨髓、外周血、脾脏等样本进行流式免疫?#20013;?#26102;,裂解红细胞是必须要做的。减少或消除红细胞(RBCs)后,可以使白细胞更容易分析,而且获取也更容易,不会因为阈值的设置导致淋巴细胞被部分排除掉。

不过,RBC裂解对免疫?#20013;?#20063;会存在一些影响,例如可能使细胞丢失、侧向散射(SSC)和前向散射(FSC)的变化、影响抗体染色效果等等。因此,选择最适合您的仪器、实验的裂解液,并在内部验证至关重要。

今天来对比一下不同的裂解方法和试剂,?#33268;?#24433;响结果的因素,为大家提供一些参考。

目前最常用的裂解方法有两类:大体积裂解(裂解/染色/洗涤)、管内裂解(染色/裂解/洗涤)。两种裂解方法的优缺点如下。
大体积裂解(LSW法)
 
优点:
管与管之间的裂解效果可实现一致,容易标准化;
比较方便地裂解掉一管样本;
剩余的细胞悬液可直接添加抗体;
适合需要大量细胞的稀有事件分析(如MRD、干细胞计数等)

缺点:
有些研究认为可能会活化单核细胞;
容易改变样本的pH值;
可能会改变淋巴亚群比例;
需要使用更多的抗体,导致成本增高。

管内裂解(SLW法)
 
优点:
可使用含固定成份的裂解液;
FSC和SSC分群可能较好,CD45/SSC的分群更?#36873;?br />
缺点:
管与管之间的白细胞和碎片比例不一致,容易影响报告中的比例;
碎片可能会较多(非绝对);
洗涤时细胞丢失的概?#35797;?#39640;。

聊完方法,再谈裂解液种类,除了自配的氯化铵裂解液,市场还有众多商品化裂解液,自配的裂解液和各类商品化裂解液对细胞的影响你?#21058;?#35299;吗?

不同裂解液对细胞的影响对比

1、对FSC/SSC和CD45/SSC的影响
 


2、Pharm Lyse和FACS Lyse的性能对比,可见Pharm Lyse能够更好地保持细胞形态。
 


3、自配氯化铵裂解液和和Optilyse的对比,自配的裂解液似乎对CD19的信噪比略有影响。
 



此文的目的并不是评估哪种裂解液好,哪种坏,大?#20197;?#24179;时使用时,要根据自己的实验进行客观选择,避免对自己检测指标有影响的,选择对检测指标有利的裂解液。

参考文献:
Lysing Methods and Reagents for Flow cytometric Immunophenotyping.  By Melanie O’Donahue and Laura Johnson.

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